DCCIK细胞治疗中晚期恶性肿瘤531例分析

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中国免疫学杂志 2011 年第 27 卷

doi: 10. 3969/ j. issn. 1000 - 484X. 2011. 04. 017

DC - CIK 细胞治疗中晚期恶性肿瘤 531 例分析 ?
鲍 锋 盛春华 杨 光 ( 解放军第二零八医院细胞移植中心 , 长春 130062)
文献标识码 A 文章编号 1000 - 484X( 2011) 04 -0360 - 03

中国图书分类号 [摘 要]

R456

目的 : 探讨手术及放、 化疗后 DC -CIK 细胞治疗中晚期恶性 肿瘤的临床疗效。 方法 : : 回顾性研究 531 例中晚 期

恶性肿瘤于 手术及放、 化疗后静 脉输注 DC - CIK 细胞 治疗 的疗效 及不 良反应。 结果 : 经 DC - CIK 细胞治 疗后 , OR 47. 8% , CBR 93. 3% , Karnofsky 评分增加 \ 20 分者 89. 8% , T 淋巴细胞 rDNA 转录活性分析 ( Ag -NORs) IS 均值由 5. 16% 增至 5. 68% , ? - ?期 3 年生存率 61. 2% , 且对外周血象及心、 肝、 肾功能均无不良 影响。 结论 : DC - CIK 细胞 安全、 有效 , 能明显 增强免 疫功能 , 改善 生 存质量 , 提高 3 年生存率。 [ 关键词 ] 树突状细胞 ; 细胞因子激活的杀伤细胞 ; 恶性肿瘤

Analysis of effects of DC - CIK cells therapy on 531 patients of middle and advanced stage carcinoma
BAO Feng , SHENG Chun -Hua, YANG Guang. Cell Transplant Center , the 208 Hospital o f P . L . A , Changchun 130062, China
[ Abstract] Objective: To assess the therapeutic effects of DC - CIK cells immun - otherapy on middle and advanced stage of carcinoma. Meth ods:The therapeutic effects and side effects of DC -CIK cells immunotherapy on middle and advanced stage carcinoma after operation, chemotherapy and radiotherapy was reviewed. Results:After the treatment, the Ag - NORs rised from 5. 16% to 5. 68% , 89. 8% of the patients. KPS rised over 20 score, objective response rate(OR) was 47. 8% , clinicalbenefit rate( CBR) was 93. 3%. The 3 - year survival rate was 61. 2%.The DC - CIK cells had no adverse influence on the heart function, liver function,renal functionand blood routine. Conclusion:DC -CIK cells are safe and valid on middle and ad vanced stage carcinoma.They can enhance immune function, ameliorate lifequality and increase 3 - year survival rate. [ Key words] Dendritic cell; Cytokine - induced killer cell; Carcinoma
th

恶性肿瘤是我国常见病及多发病, 严重威胁着 人民的健康与生命 , 治疗的主要手段是手术、 放疗、 化疗和生物治疗。在生物治 疗中, DC - CIK 细胞 , 即 树突状细胞 ( Dendritic cell, DC) 与细胞因子诱导的杀 伤( Cytokine induced killers, CIK) 细胞共培养 联合治 疗肿瘤, 是疗效较好的过继性免疫细胞治疗方法, 为 预防肿瘤复发、 消除患者体内残留的肿瘤细胞、 改善 晚期肿瘤患者的生存质量提供了新的治疗途径 , 目 前临床应用愈来愈广泛。我中心与辽宁三早肿瘤医 学研究院合作 , 自 2001 年 12 月至 2009 年 12 月, 采 用该方法治疗手术及放、 化疗后的中晚期恶性肿瘤 531 例, 取得了一定疗效 , 现报道如下。

病理学等确诊为恶性实体瘤 , 并根据国际抗癌联盟 ( UICC) 分期标准进行临床分期。其中男性 237 例, 女性 294 例。年龄 35~ 80 岁, 平均年龄 56. 89 岁。 肺癌 126 例 ( SCLC 89 例 , NSCLC 37 例 ) , 乳腺癌 119 例 , 大肠癌 79 例, 胃癌 68 例, 肝癌 41 例 , 胰腺癌 22 例 , 肾癌 18 例, 卵巢癌 16 例, 前列腺癌 11 例, 宫颈 癌 10 例, 子宫内膜癌 9 例, 膀胱癌及鼻咽癌各 6 例。 ? 期 173 例( 32. 6% ) , ? - ?期 358 例 ( 67. 4% ) , 其中 术后 312 例、 化疗后 426 例、 放疗后 289 例。 ?期 89 例中 , 分别转移至肝、 肺、 脑、 肾 上腺、 卵巢 等脏器。 KPS 评分 80 分以上 62 例, 60~ 80 分 364 例 , 60 分以 下 105 例。531 例 Ag -NORs 值均 < 6% , 其中 4% ~ 5% 之间者 129 例 , 5% ~ 6% 之间者 402 例。局部疼 痛 98 例 , 体重减少 187 例, 胸水 56 例 , 腹水 33 例。

1
1. 1

资料与方法
临床资料 本组 531 例均经影像学、 细胞学及

所有病例于手术及放、 化疗后 1~ 3 个月后来院。所 有患者或法定代理人知情并签署 5知情同意书 6, 通 过医院伦理委员会同意后接受细胞治疗。 1. 2 方法 DC 细胞培养 COBE 1. 2. 1 DC - CIK 细胞制备方法

? 本文为吉林省科技发展计划重点项目 ( No. 20090466) 作者简介 : 鲍 锋 ( 1961 年 - ) , 男 , 博 士, 主任医师 , 主要从事 肿瘤的 生物治疗研究 , E -mail: shengchunh@ 126. com 。



锋等 DC -CIK 细胞治疗中晚期恶性肿瘤 531 例分析

第4 期

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Spectra 6 血细胞分离机分离健康人外周血单个核细 胞, 分离体积为 0. 3~ 0. 4 倍血容量。经 Ficoll 淋巴 细胞分 离液从单 个核细 胞分离淋 巴细胞。用 RP MI1640 培养液洗涤 2 次, 用 BTN 无血清培养基混悬 于培养瓶中 , 置 37 e 5% CO2 孵育箱中, 2 小 时后将 悬浮 细 胞 移 出, 加 入 IL - 4 ( 500 U/ ml ) , GM - CSF ( 1 000 U/ ml) 继续培养, 每隔 2~ 3 天换液 1 次, 第 6 天加入 TNF -A ( 500 U/ ml) 。 CIK 细 胞 培养 : 分离 后 淋巴 细 胞 加入 重 组 人 IFN -C ( 1 000 U/ ml) 和 10% AB 型人血清的 RPMI1640 培养液, 24 小时后更换成含 100 ng/ ml 小鼠抗人 CD3 单克隆抗体、 IL -1A ( 1 000 U/ ml) 和 IL - 2( 1 000 U/ ml) 的 RPMI1640 完全培养液继续培养, 2 天后换含 IL -2 ( 1 000 U/ ml) 的完全培养液隔日换液维持培养。 DC -CIK 细胞 培 养: 收获 第 7 天 的 DC 细 胞 及 CIK 细胞 , 经活细胞计数后按 1B5 混合培养, 3 天后 开始应用。 DC - CIK 质量控制标准 : 流式细胞术检测 CD3 CD56 NKT \50% , CD3 CD8 \ 30% 。细 胞 存活率 \95% , 不含细菌和内毒素。 1. 2 . 2 DC - CIK细胞回输方法
9 + + + +

1. 2. 3. 5

安全性评价

本组评价标准主要为WHO

的抗肿瘤药急性及亚急性毒性反应分度标准 , 同时 参考加拿大国家癌症研究所的常见毒性标准 ( NCIC CTC) 。外周血象: 白细胞及血小板治疗前及治疗后 每周复查一次, 对治疗前及治疗后第 4 周数据进行 统计学分析。肝功能、 肾功能及心电图治疗前及治 疗后第 4 周检查, 并对治疗前后数据进行统计学处 理 , 考察治疗对上述指标是否有影响。观察患者在 治疗过程中所出现的不良反应 , 如有无发热、 皮疹、 呕吐、 腹泻等毒副反应。 1. 3 统计学方法 本组资料采用SPSS12. 0 统计软 件分析 , 计量资料采用 t 检验, 以 P < 0. 05 为标准 判断差异有统计学意义 ; 等级资料采用 Ridit 分析, 以 P < 0. 05 为标准判断差异有统计学意义; 计数资 料采用 V 2 检验 , 以 P < 0. 05 为标准判断差异有统 计学意义。

2

结果
531 例中 126 例有可测量

2. 1 客观缓解率 ( OR)

静脉输注 DC - CIK 细

病灶 , 其中 CR 6 例 , PR 53 例, OR 为 47. 8% ; SD 62 例 ( 49. 1 % ) ; PD 5 例 ( 3. 1% ) 。 2. 2 临床受益率 ( CBR) 390 例患者可评价 CBR: Karnofsky 评分增加 \20 分者占 89. 8% ; 疼痛减轻 \ 50% 者占 71. 05% ; 胸腹水减少 \50% 者占 58. 33% ; 体重量增加 \7% 者占 47. 7% 。总 CBR 为 93. 33% 。 对治疗前后 患者 Karnofsky 评分进 行统计学分 析 , 治疗后 Karnofsky 评分为 91136 ? 21 20, 较治疗前 ( 721 25 ? 3. 49) 升高, 并具有极显著性差异。 2. 3 免疫学评价 Ag - NORs 为 RNA 聚合酶的亚单 位 , 是 rDNA 转 录的调节蛋白。Ag -NORs 反映 rDNA 的转录效率 , 体现淋巴细胞活性 , 间接反映机体免疫 状态 , 因此 对肿瘤的诊断、 疗效及预后 具有重要意 [ 4] 义 。本组治疗 前后测 定外周 血 T 淋巴细 胞 Ag NORs 结果表明 , 治疗后 Ag -NORs 的 IS 均值明显升 高 , 由( 5. 16 ? 0112) % 升高至 ( 5. 68 ? 0. 08) % , 56 例 恢复正常, 较治疗前具有极显著性差异。 2. 4 生存率 531 例中 ? ~ ?期 358 例, 3 年生存 率为 61. 2% ( 219/ 358) 。 2. 5 安全性及不良反应 按照WHO 关于抗癌药急 性和亚急性分级标准统计, 治疗前后对比 , 患者白细 胞、 血小板、 谷丙转氨酶、 胆红素、 肌酐、 尿素氮及心 电图均无显著性差异 ( 表略) , 说明治疗对外周血象 及心、 肝、 肾功能均无不良影响。 531 例治疗期间, 有 6 例患者输入 DC - CIK 细胞后 有一过性发热反应( 温度 [ 37. 5 e ) , 未做处置, 24 小时

胞 5 @ 10 / 次 , 4 次为一个疗程, 每例至少治疗 2 个 疗程 , 一般治疗 4 个疗程, 最多者治疗 8 个疗程。 1. 2. 3 观察指标与疗效判定 疗效指标包括客观 缓解率( OR) ; 临床受益率( CBR) ; 免疫功能提高情况 ( T 淋巴细胞 rDNA 转录活性分析 ) ; 心、 肝、 肾功能及 外周血象等指标治疗前后的变化; 3 年生存率。 1. 2. 3. 1 可 测量病灶的客 观缓解率 ( OR) 参照 WHO 对实体瘤近期疗效判定标准, 以病人治疗前及 治疗后 1 个月 MRI、 CT 测量病灶大小 ( 双径测量 ) , 进行对照比较, 分为完全缓解 ( CR) 、 部分缓解 ( PR) 、 无变化 ( SD) 和进展 ( PD) 。以 CR+ PR 统计 客观缓 解率 ( OR) 。 1. 2. 3. 2 临床受益率 ( CBR) 价
[ 1] [ 2]

生活质量及体力改

善状 况 采 用 国 际 通 用 的 卡 氏 评 分 ( Karnofsky) 评 , 提高 \ 20 分; 疼痛 程 度评 估采 用 数字 分 级 法 , 疼痛程度减轻 \50% ; 胸腹水减少 \50% ; 体 重量增加 \7% 。 1. 2. 3. 3 免疫学 评价 分 别于治疗前、 治疗后 15 日测定患者外周血 T 淋巴细胞 rDNA 转录活性 ) 以 细胞核仁形成区嗜银蛋白 ( Ag - NORs) 酸性非组蛋白 表达活性检测值为参考, 即对 T 淋巴细胞银染染色 , 通过 KL - ? 免疫图像分 析系统, 计算淋巴细 胞 Ag NORs 面积与核面积的比值( IS% ) 疗后的检测值进行统计学分析。
[ 3]

, 对治疗前及治

1. 2 . 3. 4 考察 ? - ? 期病人 3 年生存率。

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内即降至正常, 不影响继续治疗。其余无其他不良反 应。

这样既有利于协同作用消除残存的肿瘤细胞 , 又能 促进机体自身免疫机能的恢复。总之, DC -CIK 细胞 治疗能显著改善生 存质量, 延 长生存时间 , 安全有 效 , 适于多种肿瘤的综合治疗。

3

讨论
CIK 细胞是将人外周血单个核细胞在体外多种

细胞因子作用后获得的一群异质细胞, 是一类非主 要组织相容性复合物 ( MHC) 和非 T 细胞受体( TCR) 限制性的免疫活性细胞[ 5] , 兼具有 T 淋巴细胞强大 的抗肿瘤活性和 NK 细胞非 MHC 限制性杀瘤作用 , 对各种血液系统肿瘤及实体瘤均具有广谱的杀伤效 应。DC 细胞是机体重要的抗原提呈细胞, 在介导免 疫细胞的抗肿瘤活性中具有重要作用。与 DC 细胞 共培养的 DC - CIK 细胞对肿瘤的识别和杀伤能力更 强。有研究表明 , DC -CIK 细胞体外增殖量大 , 溶瘤 作用强 [ 6] 。单纯 CIK 细胞组溶瘤率为 15% , 而共培 养的 DC - CIK 细胞组溶瘤率达 71% , 而且分泌 IFN -C 水平高, 能调节和增强机体的免疫功能 , 提高间接杀 瘤作用 。临床上 , DC - CIK 细胞特别适用于手术、 放化疗后肿瘤负荷较小的病人 , 在清除微小残留病 灶、 预防肿瘤复发转移、 提高治愈率方面发挥着重要 作用[ 10] ; 对于 晚期已无 手术和放 化疗适 应症的 病 人, DC - CIK 细胞能控制癌性浆膜腔积液 , 改 善晚期 病人的生存质量 , 延长生存期[ 11, 12] 。最近, 李卿[ 13] 、 张效东等[ 14] 报道 DC - CIK 细胞与分子靶向药物、 微 创技术等联合应用, 显著提高了疗效, 为肿瘤的综合 治疗提供了新的方式。 本组结果表明, DC - CIK 细胞对多种实体瘤有治 疗作用, 531 例患者总的客观缓解率( OR) 达 47. 8% , 总临床受益率( CBR) 达 93. 33% , ? ~ ?期患者 3 年 生存率 61. 2% , 生存期显著延长。治疗后患者 T -淋 巴细胞 rDNA 转录活性明显升高 , 说明免疫功能得 到显著增强 , 这有利于改善患者的生存质量和消除 肿瘤细胞。本组观察 DC - CIK 细胞对患者外周血象、 心、 肝、 肾功能无明显影响 , 不良反应少且程度轻, 安 全性很好。目前细胞免疫治疗尚无标准方案[ 15] , 作 者认为细胞回输的总数应大于 2 @ 10 才能具有临 床治疗效果 , 且疗效通常与输注的细胞数量成正相 关, 但也存在个体差异 , 这可能 与患者体内免 疫环 境、 肿瘤的免疫原性等有关。在治疗时机的选择上 , DC -CIK 细胞治疗应在手术及放、 化疗后尽早进行 ,
10 [7 - 9]

4

参考文献
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[ 收稿 2010 - 07 - 25 修回 2010 - 12 - 13] ( 编辑 许四平 )


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