DCCIK细胞的制备及在肿瘤治疗中的应用详解_图文

DC-CIK细胞的制备及在肿瘤 治疗中的应用 恶性肿瘤的治疗现状 恶性肿瘤 治愈45% 难于治愈55% 未缓解 缓解后复发 恶性肿瘤的多学科综合治疗 恶性肿瘤各种治疗手段各具优势与不足 ? 肿瘤外科学 ? 肿瘤放射治疗学 ? 肿瘤化学治疗学 ? 肿瘤生物学治疗 ? 侧重点不同 ? 局部与全身 ? 早、中、晚期 肿瘤免疫学治疗的优点 ? 可以有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿 瘤细胞,达到治疗肿瘤、预防复发与转移和最终根 治肿瘤的目的。 ? 具有特异性强、适用性广、副作用轻等优点。 肿瘤免疫学治疗 非特异免疫刺激剂及细胞因子治疗: IL2、IL6、 IL12、GM-CSF、TNFa、IFNa、IFNr等体内应用,装 载有细胞因子基因的细胞治疗。 ? 治疗性疫苗:肿瘤抗原或多肽抗原疫苗、装载肿瘤 抗原基因的病毒疫苗、基因修饰的肿瘤细胞疫苗、 APC细胞疫苗、抗独特性疫苗。 ? Mab导向治疗: Mab、Mab-毒素、Mab-同位素、鼠人单抗、人源单抗、双特异性抗体。 ? 过继性免疫细胞治疗:供者淋巴细胞输注、 LAK、 TIL、CIK、多种方法诱导的CTL、DC-CIK等。 ? 过继免疫疗法 ? 通过把在体外扩增的大量特异性效 应细胞回输给患者后,产生直接杀 伤肿瘤细胞的作用。 DC-CIK培养及其应用 ? CIK细胞:Cytokine Induced Killer Cell ? DC:Dendritic Cell CIK细胞特性 ? ? 分布:肝脏和外周血 来源:CD3+CD56+T细胞和CD4-CD8+T细胞 ? 一群以CD3+CD56+T为主的异质细胞包括α/βT细 胞,γ/δT细胞 与LAK、CD3AK细胞相比高效、广谱杀伤、非MHC限 制 ? DC与T细胞 ? DC高表达MHC-Ⅰ类、Ⅱ类分子,MHC分子 与其捕获加工的肿瘤抗原结合,形成肽MHC分子复合物,递呈给T细胞,从而启 动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限 制性的CD4+ Thl反应 ; DC还通过其高表达的共刺激分子(B7-1、 B7-2等)提供T细胞活化所必须的第二信 号,启动了免疫应答。 ? DC负载肿瘤抗原 肿瘤杀伤作用 DC在DC-CIK杀伤肿瘤细胞中的作用 ? 诱导抗原特异性CTL反应 ? 增加CIK细胞的扩增倍数 ? 增强CIK肿瘤杀伤效力 MHC:抗原提呈 自分泌细胞因子:INF,IL-12等 抑制CD4+CD25+调节T细胞生长 CIK细胞的制备 PBMNC (CS3000 Plus) Serum free culture medium IFNγ 第一天 Il-2 第二天 CD3 mAb 第二天 IL 1α 第二天 In a 3000ml Baxter bag 14 days ?CS-3000采集PBMNC ?Ficoll分离PBMC,洗2次 ?1-2×106/ml 接种至含无血清培养基 的 培 养 袋 中 , 1000ml/ 袋 , 加 入 IFNγ1000U/ml,放置37℃,5%的CO2孵箱 中培养24h ?加 入 IL-1α 100U/L , CD3 单 抗 50ng/ml ,重组人 IL-2 300U/L ,继续 培养,每 3 天半量换液,并补加 IL-2 300U/ml。 ? 分别于第5,7,9天取细胞做细胞表 型分析( FCM 检测),细胞杀伤实验 (MTT法) ?收集细胞,含0.5%白蛋白的生理盐水 洗涤 ?回输 CD3主要促CIK细胞增殖,促IL-2自分泌,也提高CIK杀伤活性 IFN-r/IL-1,上调细胞表面IL-2R表达,IFN-r先于IL-2加入,有效激活效应细胞,增强抗肿 瘤活性 DC的培养 BMDC Serum free culture medium IL-4, GM-CSF TNFα IL-4 , GM-CSF TNFα PBDC 7~9 days Tumor antigen 成熟DC DC-CIK共培养 成熟DC + CIK细胞 CIK细胞的增殖 7 6 5 cell number 4 3 2 1 0 5 10 15 20 25 days maj inl an070829d0.001 maj inl an070905d6.003 maj inl an070907d9.003 R1 R1 R1 0 200 400 600 FSC- Heig ht 800 1000 0 200 400 600 FSC- Heig ht 800 1000 0 200 400 600 FSC- Heig ht 800 1000 maj inl an070829d0.001 maj inl an070905d6.003 maj inl an070907d9.003 62.% 84.7% 89.5% R2 100 101 102 103 CD3 PerCP 104 100 101 R2 102 103 CD3 PerCP 104 R2 100 101 102 103 CD3 PerCP 104 maj inl an070829d0.001 maj inl an070905d6.003 maj inl an070907d9.003 28.2% 43.1% 52.3% 100 101 102 CD4 FITC 103 104 100 101 102 CD4 FITC 103 104 100 101 102 CD4 FITC 103 104 CIK细胞对自体原代白血病细胞的 杀伤作用 ?CIK细胞对自体原代白血病细胞 65 60 55 Cytotoxixity % 50 45 40 35 30 25 0 1 2 有明显杀伤作用,且其细胞毒作用 随着效靶比的增加而进一步

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